一、檢測項(xiàng)目概述

聚山梨醇酯80，又名吐溫80，Tween80，（以下簡稱吐溫80），化學(xué)式為C24H44O6(C2H4O)n。是一種非離子型表面活性劑，易溶于水，有增溶的作用，溶于乙醇、植物油、乙酸乙酯、甲醇、甲苯，不溶于礦物油。可用作乳化劑、分散劑、增溶劑或穩(wěn)定劑等，廣泛應(yīng)用于藥物、食品，當(dāng)作為輔料在藥物制劑中時(shí)，其含量從1％～12％不等。

如何在生物藥工藝殘留及制劑反向工程新藥制劑開發(fā)的工作中控制吐溫80地質(zhì)量和安全性是個(gè)非常重要的問題，中國藥典2020版三部收錄的數(shù)種生物制品中對(duì)吐溫-80殘留有明確規(guī)定，且收錄了吐溫-80殘留通用檢測方法-紫外分光光度計(jì)法。但該方法操作較為復(fù)雜且耗時(shí)較長。實(shí)驗(yàn)室需開發(fā)一種快速、簡便的分析方法來對(duì)產(chǎn)品中的吐溫-80進(jìn)行精確定量分析。

二、檢測方法參考

藥典中聚山梨酯80殘留量測定法，依據(jù)聚山梨酯80中的聚乙氧基（Polyethoxylated）和銨鈷硫氰酸鹽反應(yīng)形成藍(lán)色復(fù)合物，可溶于二氯甲烷，用比色法測定聚山梨酯80含量。量取供試品1.0ml于離心管中，加乙醇-氯化鈉飽和溶液5ml，搖勻，以每分鐘3000轉(zhuǎn)離心10分鐘，取上清液，再用乙醇-氯化鈉飽和溶液1.0ml小心沖洗管壁，洗液與上清液合并，以每分鐘3000轉(zhuǎn)離心10分鐘，上清液置55℃水浴中，用空氣吹掃法將其濃縮至0.1～0.5ml，加1ml水溶解。

準(zhǔn)確加入二氯甲烷2.0ml、硫氰鈷銨溶液（稱取硝酸鈷6.0g、硫氰酸銨40.0g，加水溶解并稀釋至200ml）3.0ml，加塞，混勻，室溫放置1.5小時(shí)，每15分鐘振蕩1次，測定前靜置半小時(shí)，棄上層液，照紫外-可見分光光度法（通則0401），在波長620nm處測定下層二氯甲烷液的吸光度。用二氯甲烷作空白對(duì)照。

精密量取對(duì)照品溶液0μl、10μl、25μl、50μl、75μl、100μl，加入預(yù)先加入1ml水的離心管中混勻，準(zhǔn)確加入二氯甲烷2.0ml、硫氰鈷銨溶液3.0ml，加塞，混勻，每15分鐘振蕩1次，測定前靜置半小時(shí)，棄上層液，照紫外-可見分光光度法（通則0401），在波長620nm處測定下層二氯甲烷液的吸光度。用二氯甲烷作空白對(duì)照。對(duì)照品溶液系列濃度（μg/ml）對(duì)其相應(yīng)的吸光度作直線回歸，相關(guān)系數(shù)應(yīng)不低于0.98，將供試品溶液吸光度代入直線回歸方程，求得供試品溶液中聚山梨酯80含量（μg/ml）。

實(shí)驗(yàn)室今天分享另外一種利用高效液相色譜檢測吐溫80的方法，對(duì)其靈敏度、線性范圍以及廣泛適用性提出了非常高的要求。需要利用凝膠色譜柱，柱溫30℃；以0.02moL/L醋酸銨溶液-乙腈(90：10)為流動(dòng)相，流速0.6mL/min；采用蒸發(fā)光散射檢測器，漂移管溫度120℃，氮?dú)饬魉?.0L/min，進(jìn)樣量10μL。在該實(shí)驗(yàn)條件下一定濃度范圍內(nèi)吐溫80的線性關(guān)系良好。

三、檢測應(yīng)用范圍

吐溫80作為生物制劑的一種保護(hù)劑輔料使用，可能會(huì)影響蛋白質(zhì)制劑的質(zhì)量，從而對(duì)功效、安全性和穩(wěn)定性起到不利作用。目前，監(jiān)管部門對(duì)吐溫80的控制要求越來越嚴(yán)格。準(zhǔn)確的定量分析研究有助于藥物的安全性評(píng)價(jià)。實(shí)驗(yàn)室可利用高效液相色譜、紫外可見分光光度計(jì)等對(duì)吐溫80進(jìn)行含量、酸度、純度、乙二醇和二甘醇、環(huán)氧乙烷和二氧六環(huán)、水分、脂肪酸組成、重金屬含量等項(xiàng)目測試服務(wù)。更多檢測需求可咨詢了解，實(shí)驗(yàn)室根據(jù)送樣樣品，依據(jù)藥典及其他各行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，個(gè)性化定制檢測服務(wù)，并提供分析測試報(bào)告。

四、實(shí)驗(yàn)室優(yōu)勢

實(shí)驗(yàn)室擁有氣相色譜、高分辨液質(zhì)、液質(zhì)三重四級(jí)桿、氣質(zhì)質(zhì)、掃描電鏡、透射電鏡、核磁、二次離子質(zhì)譜等多類專業(yè)檢測設(shè)備儀器，遵照ISO17025和GMP等高標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行管理，為生物醫(yī)藥、化工領(lǐng)域等領(lǐng)域伙伴產(chǎn)品生產(chǎn)過程中可能產(chǎn)生的雜質(zhì)提供評(píng)估報(bào)告、方法開發(fā)、驗(yàn)證及樣品檢測等一系列完整的解決方案，工程師全程服務(wù)問題及時(shí)溝通。